產品信息：
名稱：4’,6-Diamidino-2-phenylindole dihydrochloride (DAPI)
說明：DNA鏈熒光染色。
別名：2-(4-Amidinophenyl)-6-indolecarbamidine/dihydrochloride
分子式：C16H15N5 · 2HCl
分子量：350.25
CAS：28718-90-3
外觀：黃色結晶性粉末
特性：純度：≥90% (HPLC和 TLC)
溶解性：溶于水，最大參考濃度20mg/ml，加熱有助于溶解。
R：36/37/38 S：26-36
DAPI是一種可以穿透細胞膜的藍色熒光染料。和雙鏈DNA結合后可以產生比DAPI自身強20多倍的熒光。和EB(ethidium bromide)相比，對雙鏈DNA的染色靈敏度要高很多倍。
DAPI染色常用于細胞凋亡檢測，染色后用熒光顯微鏡觀察或流式細胞儀檢測。DAPI也常用于普通的細胞核染色以及某些特定情況下的雙鏈DNA染色。
DAPI的最大激發波長為340nm，最大發射波長為488nm；DAPI和雙鏈DNA結合后，最大激發波長為364nm，最大發射波長為454nm。
本DAPI溶液用水配制。
用于細胞核染色時，推薦的DAPI工作濃度為0.5-10μg/ml。
儲存條件： −20℃避光保存
DAPI簡要說明
收到后儲藏：*室溫 *避光
分子量:• 350.3 (dihydrochloride) • 457.5 (dilactate)
吸收峰/散射峰是461nm/358nm。連接至DNA
DAPI是一種常用的多色核熒光染料它的藍色熒光顏色光鮮顯著區別于其他結構熒光探針所發出的綠、黃、紅等熒光。
使用時應遵照我們的備忘錄，DAPI染色劑專用于胞核染色，幾乎沒有細胞質標記點。任意一形態的DAPI在這說明內介紹的都有很好的效果。DAPI, dilactate可能水溶性更好。復染技術說明與寬范圍細胞學標記技術相同———直接或間接抗體結合探測方法，mRNA原位雜交或用細胞結構特異性熒光染料染色。DAPI還可用于在多色流式細胞試驗中分析熒光標記細胞。以下說明可用于指導組織染色或非固定的細胞或組織染色。
緒論
藍色熒光的DAPI核酸染料優先染雙鏈DNA，它與小溝槽內的AT堿基對結合。1. DAPI連接到雙鏈DNA產生一個20折疊的熒光增強這是由于水分子在DAPI以及小溝槽的移位造成的。2.DAPI 也可以用于連接RNA，只是連接的方式不同———一種觀點是可能是AU堿基對選擇性嵌入。3. DAPI/RNA 復合體可以出現更長波長的最大熒光激發比DAPI/dsDNA復合體并且量子產率僅為它的20﹪。
材料儲存與操作:
DAPI dihydrochloride (MW = 350.3) 與DAPI dilactate(MW = 457.5)均為10mg包裝的。FluoroPure™（熒光純）級別的DAPI dihydrochloride 純度 ≥98%也為10mg包裝的。收到后將管形瓶存放于室溫并避光保存。固體至少可穩定保存一年。
將5 mg/mL DAPI(14.3 mM 的dihydrochloride 或10.9 mM 的 dilactate)溶解到一個管形瓶（10 mg）有2 mL 的去離子水 (dH2O) 或是二甲基酰胺 (DMF)。水溶性差的DAPI dihydrochloride溶到水中可能需要更長的時間，聲裂法有時是必要的。
要點:
沒有一種DAPI衍生物是極易溶于磷酸鹽緩沖生理鹽水(PBS)的。需長期保存時原液可分裝并保存在≤–20°C。短期保存時可以在2–6°C避光保存。操作適當DAPI溶液至少可穩定保存六個月。
注意:
DAPI是已知的一種誘變劑，操作要小心。顏料必須安全可控的處理。DAPI可在水溶液中被活性炭濾過。吸附顏料的炭必須經安全可行的方法處理。
熒光光譜性質:
DAPI 結合到 dsDNA上吸收峰 是358 nm, 散射峰是 461 nm。DAPI能夠被氙或水銀燈或UV激光激發。利用UV激發源DAPI可被用于流式細胞計量術。
熒光顯微術中復染法粘附細胞的說明
樣品制備:
用固定法處理你的標本，DAPI染色通常在其他染色的最后進行。注意：標本的固定和透化并非DAPI復染的必要步驟。
復染法說明:
1.1 將標本簡單的放入磷酸鹽緩沖生理鹽水(PBS)中保持平衡。
1.2 在PBS中將DAPI原液稀釋到 300 nM，將大約300 μL 這種稀釋的 DAPI染液加到蓋玻片上制備，確保細胞被完全覆蓋。
1.3 培養1–5 minutes.
1.4 將標本在PBS液中沖洗幾次，濾干蓋玻片上過多的緩沖液。我們推薦使用固裝的含有抗退色試劑的介質，如我們獨家提供的SlowFade ® Antifade Kit (S2828), SlowFade Light Antifade Kit(S7461) or ProLong ® Antifade Kit (P7481).
1.5 用熒光顯微鏡及合適的濾鏡觀察標本
流式細胞計量術中懸浮細胞復染的說明
樣品制備：
用固定法處理你的標本或采取以下方法：
2.1 收集2 × 105 到 1 × 106 cells的細胞懸液一份。
2.2 通過離心及去除上懸浮物來獲得細胞團塊。
2.3 將在殘留液的團塊重新懸浮，并在室溫中加入1 mL 的 PBS。
2.4 將重新懸浮細胞整體轉移到4 mL –20°C的無水乙醇中。轉移時通過移液緩慢的將懸浮液在旋轉峰速時移入乙醇中。留細胞在–20°C的無水乙醇中放置 5–15 minutes。
2.5 通過離心及去除上懸浮物來獲得細胞團塊
2.6 輕彈試管使團塊松動在室溫下加入5 mL的PBS讓細胞再水合15 minutes
復染法說明：
3.1 將DAPI原液稀釋到3 μM在染色緩沖液中(100 mM Tris, pH 7.4, 150 mM NaCl, 1 mM CaCl2, 0.5 mM MgCl2, 0.1% Nonidet ® P-40).每個細胞標本需要1 mL
3.2 離心懸浮細胞(from step 2.6)棄上清，輕彈松動團塊并加1 mL DAPI在緩沖液中的稀釋液。
3.3 室溫下培養15 minutes。
3.4 在染料存在的情況下用流式細胞儀分析。如果細胞在熒光顯微鏡下可見，離心標本棄上清并且在新鮮緩沖液中再懸浮。點一滴懸液在載玻片上，蓋蓋玻片觀察。
染色體熒光素原位雜交復染法的說明
樣品準備：
根據標準步驟5，6準備標本。
在復染之前用去離子水快速沖洗備好的樣本以去除殘留在玻片上的buffer鹽，這最后的沖洗有助于減少玻片上的非特異背景染色。
將標本在空氣中晾干。
復染說明：
4.1 用PBS將DAPI原液稀釋到30nM，將300μL這種染色液直接移取到標本上，用一個塑料的蓋玻片使染液在玻片上分布均勻。
4.2 將標本在暗房中室溫培養30分鐘。
4.3 小心的移去蓋玻片，用PBS 或dH2O快速沖洗標本，以除去未結合的染液。
4.4 用吸水紙在組織周圍輕輕印拭去玻片上多余的液體。
4.5 將一個玻璃蓋玻片蓋到載玻片上，用蠟或者指甲油封閉，也可以將標本按照廠商的說明用抗脫色試劑包埋。
4.6 用熒光顯微鏡在適當的濾光器下觀察標本。
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